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点击次数:215 发布时间:2019-04-25

蛋白酶K是用来做什么实验的?

 
  蛋白酶K是一种用途广泛的非特异性的丝氨酸蛋白酶。在pH4到pH12的条件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。蛋白酶K常用于提取mRNA、基因组DNA,或用于从各种细胞中提纯DNA和RNA时消化杂蛋白。还可用于糖蛋白的修饰,以及蛋白质结构研究等方面。
  蛋白酶K的应用比较广泛,它可以消化包围靶DNA蛋白,因此使用罗氏蛋白酶K能够增加探针与靶核酸结合的机会增强杂交信号,但在使用罗氏蛋白酶K时要注意使用的浓度,过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。
  蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果。
  蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月。孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。

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